MSCs的载体及基因修饰

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基因工程中载体的选择也是研究的重点之一,代写工程硕士论文不同种类的组织工程对载体的要求也不尽相同。总的来说,理想的载体应该具备良好的组织相容性、适当的机械性能、合适的孔率、低免疫原性、体内无毒降解等条件,选择MSCs最适载体的研究工作取得一些进展。Tang[16]比较了冻干松质骨和羟基磷灰石复合人MSCs在裸鼠皮下植入模型不同时期成骨的组织学差异,认为冻干松质骨明显比羟基磷灰石更有利于成骨。说明不同的载体对组织的修复效果有影响。Petite等[17]分别用珊瑚支架复合MSCs的组织工程骨、珊瑚支架复合红骨髓、及单独使用珊瑚支架修复羊大段骨缺损模型,结果珊瑚复合MSCs组临床愈合率明显高于其它组,证明了MSCs在骨、软骨修复方面的优势,也证明珊瑚适合作为MSCs的载体。　　在软骨组织工程方面,Ponticiello等[18]用成人MSCs复合可吸收明胶海绵,并在培养基中加入10 ng/ml TGF-β3共同培养21d后,发现有硫酸葡糖胺聚糖及Ⅱ型胶原等代写工程论文软骨样细胞外基质的形成,且细胞密度为12×106/ml组的软骨样细胞外基质产量明显高于以其它密度组。认为明胶海绵是复合MSCs修复软骨的理想载体,不同的细胞密度生成的软骨样细胞外基质产量也不同。Mason等[19]用聚羟基乙酸(Poly glycolic acid,PGA)作载体培养组织工程软骨也取得成功。　　在肌肉和肌腱组织工程方面,Young等[20]观察了MSCs复合胶原修复兔跟腱缺损模型的力学、组织学和功能恢复明显好于对照。Awad等[21]比较了MSCs复合I型胶原和单用胶原修复兔髌腱术后四周的生物力学和显微结工程硕士论文 代写构,认为MSCs复合I型胶原组生物力学性能明显较对照组强(最大张力、弹性模量、应变能量密度分别比对照组强26%(P<0·001),18%(P<0·01),和33%(P<0·05),说明Ⅰ型胶原能作为腱组织工程的合适载体。　　有的学者研究组织工程骨复合分化诱导剂的缓释系统以达到长时间促进MSCs增殖和分化的目的,最终进一步促进成骨。Peter等[22]将TGF-β1与PLGA和PEG混合形成的微粒结合,在体外实验证明能长时间释放TGF-β1并促进MSCs增殖和分化。用缓释系统延长分化诱导剂对MSCs的作用时间以加强组织工程中MSCs的增殖和分化是应用研究的一个新方向。　　MSCs更新率低而代谢活力高,可通过转基因技术获得目标工程硕士论文怎么写基因并在体内外长期高效的表达。有学者将BMP-2、TGF-β1等分化诱导剂的基因转入MSCs,使其长期表达相应目标基因、并通过自分泌或旁分泌方式作用于MSCs自身及临近细胞,从而达到促进定向分化和增殖的目的。这种把基因工程和组织工程有机结合起来的方法有人称为:基因增强的组织工程(Gene-enhanced tissue engineering)[19]。　　Cheng等[2]用腺病毒转染BMP-2基因到成年新西兰兔MSCs,体外培养1周后可以检出BMP-2表达;转染的MSCs能够向成骨系细胞方向分化,与未转染及空白转染对照组相比,实验组Ⅰ型胶原、骨桥接素、骨钙素的mRNA表达明显增强;再将转染的MSCs移植到自体脊柱腰5、6横突间隙,X线检查和组织学证实腺病毒转染BMP-2基因的MSCs组有明显成骨,而空白转染组无成骨。在进一步的研究中,Moutsatsos等[3]利用遗传工程技术把四环素可调控表达的载体编码的BMP-2基因转入MSCs,在体外、体内实验中证明可以用强力霉素控制BMP-2基因的表达,从而实现MSCs成骨分化的可控性。Mason等[19]用腺病毒转染BMP-7基因到兔MSCs体外实验证实有BMP-7表达,在兔膝关节软骨缺损模型中这种基因修饰的组织工程的软骨修复时间和质量明显优于对照。国内,郭晓东等[23]已经成功地用脂质体把TGF-β1基因转入人MSCs,在体外有效表达并刺激Ⅱ型胶原的生成;同时,观察转基因MSCs双层软琼脂培养10~14 d未见细胞克隆形成,认为转基因的MSCs无恶变倾向。基因修饰的组织工程加强了MSCs的修复作用,是目前种子细胞研究的一个热门之一,其技术方法、生物安全性和基因表达的时间和强度的可控性等方面有待深入研究。　　综上所述,由于MSCs具有干细胞的传代和多向分化能力等优良特性,使得它在组织工程中具有广阔的应用前景。目前,在MSCs的分离纯化技术、分化方向的调控、载体的选择、基因修饰等方面尚有待深入研究。若您对职称论文有所需求，请到职称论文专区下载http://www.dxlws.com/zclwdx/