1.1 阿魏菇生物学特征 阿魏菇属于低温型食用菌，其菌丝在单一恒温条件下，很难形成子实体，必须经过适当的冷刺激后才能诱导菌丝分化，形成原基，产生子实体。生理成熟的菌丝体需要自然或人为地对阿魏菇菌丝体进行0-15℃低温处理才能诱导菌丝体分化，子实体发育也需要给予短暂的低温变温（5-20℃）刺激。较低温度促使阿魏菇繁殖后代，产生繁殖体[4]。 阿魏菇菌丝体的低温处理决定了阿魏菇能否完成从菌丝生长向子实体发育的生理跨跃，菌丝体如果不能有效完成这一过程，则难以形成子实体，或是出菇慢、出菇不齐、出菇期延长，并影响阿魏菇的品质和产量。近年来则有观点认为菌丝进入生殖生长阶段也是一种对抗逆境的反应，而合适的低温环境正是营造了某种逆境[5-9]。
1.1.1 阿魏菇的生活史
多数食用菌的生活史（如图1-1所示）是：担孢子→担孢子萌发→初生菌丝（单核菌丝）→两条可亲和的单核菌丝融合→次生菌丝（双核丝）→子实体原基→子实体→担孢子[10]。
1.1.2 阿魏菇生活的环境条件 1 营养因素 阿魏菇是营寄生或腐生的一种大型木腐真菌，属异养型生物。阿魏菇的营养主要包括碳源、氮源、无机矿物质营养和维生素等。人工栽培条件下，阿魏菇能利用棉籽壳、玉米芯、木屑、麸皮、玉米粉等作为营养来源，对其进行生物降解从而转化为富含蛋白质、碳水化合物的菌丝体和子实体[11]。 2 温度因素 阿魏菇子实体的发生是一个复杂的生理发育过程，其形成除固有的遗传控制外，还需要特定的环境条件，而低温刺激就是出菇前一个重要的诱发条件。 阿魏菇菌丝在 0～30℃范围内都能生长，在 0～25℃温度范围内，随着温度上升，菌丝长势越来越好，生长速度加快。适宜温度为 23～25℃，最适温度23.8℃。超过 27℃时菌丝生长速度减慢，长势变弱，35℃以上，菌丝停止生长。阿魏菇子实体的分化温度为 0℃～15℃，子实体 5℃～18℃均可生长，在13℃～15℃时生长速度较快且菇质好[12]。 3 湿度因素 菌丝生长阶段，对培养基含水量有严格的要求，培养料含水量应在60%～70%，扭结期（原基期）较高的相对湿度（90～95%）有利于菌丝体扭结和原基的形成；子实体发育期，空气相对湿度应保持在85%～95%。空气湿度不够，子实体生长缓慢，子实体表面易形成龟裂，而空气湿度过大易造成绿霉污染。 4 空气因素 阿魏菇是好气型真菌，菌丝和子实体生长发育都需要新鲜的空气。特别是在子实体形成发育期，代谢旺盛，对氧的需求量尤为大。在不通风的菇房中，子实体生长缓慢或变黄，菇房 CO2浓度超过0.5% 时，容易产生畸形菇体[13]。
第 2 章 低温处理对阿魏菇菌丝体生理相关酶活力的影响
2.1 材料与方法 2.1.1 供试菌种 阿魏侧耳 （Pleurotus Ferulae）NB-1，新疆农科院提供；
2.1.2 主要试剂 生化试剂：马铃薯浸出粉（北京奇松生物科技有限公司）； 优级纯：MET(甲硫氨酸 )(Biosharp)、NBT( 氮 蓝 四 唑 )(Valley Blod,Losangles.USA)； 分析纯：葡萄糖（天津市福晨化学试剂厂）、磷酸氢二钠（天津市化学试剂三厂）、磷酸二氢钾（天津市化学试剂三厂）、冰乙酸（天津永晟精细化工有限公司）、无水乙酸钠（天津永晟精细化工有限公司）、H2O230%（天津市北辰方正试剂厂）、EDTA-Na2（天津市化学试剂三厂）；PEG 6000(上海山浦化工有限公司)、Triton X-100(曲拉通 X-100)(天津市光复精细化工研究所)、核黄素(上海蓝季科技发展有限公司)。
第 3 章 低温处理对阿魏菇菌丝体蛋白质表达的影响.......................19 3.1 材料与方法................19 3.2 试验方法...............20 3.3 结果与分析...................25 3.4 讨论.............................29 3.5 结论......................30 第 4 章 低温处理对阿魏菇菌丝体蛋白质、氨基酸及维生素积累的影响.............32 4.1 材料与方法......................32 4.2 试验方法......................33 4.3 结果与分析...................37 4.4 结论.........................52 第 5 章 结论与展望....................52 5.1 本文研究总结.....................52 5.2 论文的特色......................53 5.3 展望........................53
总结
本文以阿魏菇（NB-1）为液体发酵菌种，设置低温处理（10℃）组和对照组，研究了阿魏菇菌丝中蛋白提取方法，漆酶同工酶和酪氨酸酶同工酶、菌丝保护酶活性、蛋白质、维生素、氨基酸含量的变化，探索了低温处理条件下阿魏菇菌丝体的生理生化变化及营养积累情况。 1 蛋白提取方法的研究结果 采用TQ:菌丝1:1（v/w）、TQ:菌丝（v/w）1:2、Tris-Glycine：菌丝1:1（v/w）、Tris-Glycine:菌丝1:2（v/w）、1×PBS ：菌丝1:1（v/w）、1×PBS：菌丝1:2（v/w）、直接离心法和植物提取试剂盒BSP053对阿魏菇菌丝体中蛋白进行提取。结果表明：8种不同的蛋白提取方法在蛋白提取效率及蛋白电泳结果表现出了很大差异，SDS-PAGE电泳，均获得了清晰地条带，1×PBS和直接离心法可获得较清晰地条带，提取的蛋白种类较完整，BSP053法提取的蛋白条带明显少于其他提取方法，且条带不清晰，提取效果最差，所以后续试验中均采用1×PBS ：菌丝1:1（v/w）提取阿魏菇菌丝中的蛋白。 2 低温处理对阿魏菇菌丝保护酶活性的影响 25℃培养阿魏侧耳菌丝体，漆酶变化不明显。10℃处理3h-48h漆酶活力增加显著（p<0.01），10℃处理9h-12h漆酶活力明显提高，处理24h以后漆酶活力变化趋于稳定。25℃培养阿魏侧耳菌丝体，酪氨酸酶变化不明显。10℃处理3h-48h漆酶活力增加显著（p<0.01），10℃处理3h-12h，酪氨酸酶活力低于对照组，10℃处理12h-48h，酪氨酸酶活力出现明显的提高。 3 低温处理对酪氨酸酶酶和漆酶同工酶的影响 通过比较低温处理和对照组酪氨酸酶和漆酶同工酶条带情况，低温处理后，分子量为28.0KDa的酪氨酸酶同工酶条带变淡，分子量为43.5KDa的条带明显比对照组深。低温处理后，漆酶同工酶中分子量为45.0KDa 和30.0 KDa的两条酶带明显加深，且在低温处理后期（处理24h～48h）出现了一条分子量分子量为33.0KDa的酶带。
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